[분자 생물학] Cell detachment

안녕하세요~ 이번에 포스팅할 내용은 Cell detachment입니다.

 

Cell detachment는 당연히 Adhesion cell에만 해당합니다.

 

Suspension cell은 기본적으로 부착을 안하기 때문에 상관 없지만 Adhesion cell은 subculture 시 flask나 dish에서 떼어내야합니다.

 

Adhesion cell은 원래 in vivo에서는 ECM(extracellular matrix)에 달라 붙어있고 adhesion molecule이 부착하고 있습니다.

 

cell이 전체적으로 붙어 있는건 아니고 integrin 들이 몰려 있어서 그 쪽 부분에서 부착하는데 이것을 Focal adhesion이라고 합니다.

 

ECM 또는 flask, dish에서는 adhesion molecule인 integrin, caherin, selectin, immunoglobulin-like adhesion molecule들이 붙어있습니다.

 

Cell detach를 위해 adhesion molecule들을 역할을 못하게 해야하는데 일반적인 방법으로 Trypsin-EDTA를 사용합니다.

 

1. Trypsin의 역할

Trypsin은 많은 사람들이 알다시피 Proteinase입니다. adhesion molecule을 직접적으로 잘라서 function을 억제하여 부착면과의 interaction을 제거합니다.

 

2. EDTA의 역할

EDTA (ethylene-diamine-tetraacetic acid)는 Chelator로 서 2가 양이온과 interaction 합니다.

2가 양이온 중 Ca2+ (칼슘이온)은 adhesion molecule의 function에서 중요한 factor인데 Ca2+를 EDTA가 경쟁적으로 붙잡음으로써 Adhesion molecule간의 interaction을 제거합니다.

 

Trypsin-EDTA를 사용해서 subculture를 사용하지만 이것들의 단점은 cell surface의 protein들에 손상을 입힌다는 것입니다. cell surface에는 Ion Channel, Receptor 같은 cell function에도 중요한 역할을 하는 단백들이 많기 때문에 Trypsin-EDTA는 사실 cell에게 살짝 harsh한 감이 좀 있습니다.

 

번외 1. TrypLE (thermofisher scientific 제품)

Trypsin은 돼지 췌장에서 유래된 protease를 가지고 만들기 때문에 다른 protease들도 약간 섞여 오기 때문에 cell surface protein의 손상이 큰 반면 TrypLE라는 제품은 thermofisher scientific에서 만드는데 Trpysin 재조합 단백으로 순도가 높고 cell surface protein의 손상이 적다고 합니다. 물론 이 상품에도 여기에도 EDTA는 포함되어있습니다.

 

번외 2. Versene (thermofisher scientific 제품)

Versene은 역시 thermofisher scientific 제품인데 이 제품은 PBS 베이스에 EDTA만 첨가한 버퍼입니다. 이 버퍼는 이론상 protease가 없기 때문에 가장 gentle한 방법으로 cell을 detach할 수 있습니다. 하지만 너무 약하기 때문에 cell detach가 어려운 세포주에서는 사용할 수 없습니다. 이 제품은 EDTA가 0.5mM였던 것 같네요.

 

번외 3. Scraper

Scraper는 말 그대로 cell을 lysis하는 실험에서만 사용합니다. lysis buffer를 dish나 flask, well에 부은 후 긁어서 cell을 모읍니다. cell이 mechanical 적인 이유로 터지기 때문에 lysis buffer에는 protease inhibitor가 있어야합니다.

 

 

Cell을 detach하는 이유는 subculture외에도 실험을 하기 위함도 있습니다.

 

실험 목적에 맞는 cell detach 방법을 사용하면 되겠습니다.

 

이번 포스팅은 여기서 마치겠습니다~!