ELISA (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay)
안녕하세요, 이번에 포스팅할 내용은 ELISA 입니다.
ELISA는 굉장히 많이 사용되는 실험법 중 하나죠
ELISA의 종류는 어떤 것이 있을까요 ??
ELISA의 방식에는 Direct, Indirect, Sandwich, Sandwich with Biotin-Streptavidin detection이 있습니다.
Sandwich with Biotin-Streptavidin detection는 약간 Sandwich에서 Customized된 느낌입니다.
1. Direct ELISA
Direct ELISA는 위의 그림처럼 Plate에 Antigen을 Coating 후 1차 Antibody를 붙인 후 바로 Substrate와 반응을 시킵니다.
Direct ELISA는 2차 Antibody를 사용하지 않기 때문에 1차 Antibody에 Enzyme이 conjugate 되어있습니다.
일반적으로 Substrate를 TMB로 사용하기 때문에 TMB를 Reaction에 관여하는 HRP (Horse Radish Peroxidase)를 많이 Conjugate 합니다만 Substrate는 정해져 있는게 아니기 때문에 Enzyme이 정해져 있지 않습니다.
TMB를 Substrate로 사용하는 것은 Plating 한 Antigen의 Quantification을 하기 위해 사용합니다.
Direct ELISA는 장점과 단점이 있는데요,
장점 1. Antibody Cross-activity가 적다.
장점 2. 간단하고 빠르다 입니다.
단점 1. Antibody를 구하기 힘들다, 그리고 비싸다
단점 2. Signal이 약하다.
2. Indirect ELISA
Indirect ELISA는 Direct와는 다르게 2차 Antibody를 사용하는 것인데요
2차 Antibody를 사용하는 이유는 Signal Amplification, Cost에 있습니다.
1차 Antibody에 Enzyme을 conjugation 시킬 경우 Antigen에 한정된 Antibody만 붙을 수 있는데
2차 Antibody를 사용할 경우 1차 Antibody에 붙기 때문에 더 많은 Antibody가 붙을 수 있습니다.
2차 Antibody에 Enzyme을 Conjugate 시키기 때문에 훨씬 많은 Signal이 형성될 수 있습니다.
Indirect ELISA는 2차 Antibody에 Enzyme이 달려 있기 때문에 Enzyme을 바꾸면 여러 Reaction을 발생시킬 수 있습니다.
Indirect ELISA의 장단점은
장점 1. Signal 이 세다.
장점 2. 가격이 싸다.
장점 3. 2차 Antibody에 여러 Enzyme을 붙여 1차 Antibody 보다 Enzyme 선택 폭이 넓다.
단점 1. 과정이 길다
단점 2. Antibody의 Cross-activity가 증가한다.
3. Sandwich ELISA
Sandwich ELISA는 Antigen이 아닌 Antibody를 Plate에 Coating 하는 것에 차이가 있습니다.
Sandwich ELISA는 1차 Antibody를 Coating 후 Antigen을 붙인 후 다시 1차 Antibody를 붙이고 2차 Antibody를 붙입니다.
Sandwich ELISA는 Direct, Indirect ELISA 와 달리 굉장히 Specificity가 좋고 Sensitive합니다.
낮은 농도의 Sample의 농도를 Quantification하기에 좋습니다.
Sandwich ELISA 는 하지만 Antibody 사용량이 많은 만큼 Cost가 비쌉니다.
Sandwich의 장단점은
장점 1. Sensitive 하여 Low concentration의 Sample Quantification 가능
장점 2. Specificity가 높아 신뢰도가 높음
단점 1. Cost가 높다.
단점 2. 복잡하고 step이 길다.
번외로 Sandwich with Biotin-Streptavidin detection은 추후 따로 포스팅하도록 하겠습니다~!@